Q1：怎样保证酶产品的无菌？

A1：终端灭菌法

Q2：酶活是怎么测定的？

A2：酶制剂中酶活检测方法包括：

        还原法：酶与底物在特定的条件下反应，在此反应体系中添加化学试剂，酶促反应的产物可与该化学试剂发生反应,生成有色物质。通过在特定的波长下 比色，求出还原产物的含量，从而计算出酶活力的大小 。

        色原底物法：通过底物与特定的可溶性生色基团物质结合，合成人工底物。该底物与酶发生反应后释放生色基团，用分光光度法测定颜色的深浅，在与已知标准酶所做的曲线比较后，即可求出待测酶的活力

粘度法：该法常用于测定纤维素酶、木聚糖酶和β-葡聚糖酶的活力。当酶作用于粘性底物时会使其粘度大为降低。测定一定条件下溶剂和样品溶液的运动粘度，便可计算特性粘数，并以此来判断酶的活力。

        高效液相色谱法：酶与其底物在特定的条件下充分反应后，从反应体系中提取溶液进行色谱分析，测量各个样的峰高和半峰高，计算出酶促反应生成物的含量，从而换算出酶活力的数值。

        免疫学方法：根据酶与其抗体之间可发生特定的沉淀反应，通过待测酶和标准酶的比较，最终确定酶活力。

        琼脂凝胶扩散法：将酶作用的底物与琼脂混合熔融后，制成琼脂平板。用打孔器在琼脂平面上打出一个约4-5mm半径 的小孔。在点加酶样并培养24h以后，用染色剂显色或用展开剂展开显出水解区，利用水解直径和酶活力关系测定酶活力。

Q3：影响酶活测定的因素有哪些？

A3：酶的浓度：假设一分子的唾液淀粉酶，在底物充足，其他条件均适宜的条件下，1秒钟能将5mmol的淀粉分子水解，那么该过程中酶促反应的速率为5mmol/s,在该条件下唾液淀粉酶的活性也为5mmol/s。如果将同等制剂中酶分子数增加为10个，则酶的浓度增加10倍，则1秒钟就能将50mmol的淀粉分子水解，此过程中酶促反应的速率为50mmol/s。

        底物浓度：底物在较低浓度范围内，底物浓度越高，底物与酶结合的速率就越快，从而使酶促反应越快。因此在测定酶活的过程中，一般都在底物浓度饱和的情况下进行测定。

      PH和温度

        抑制剂和激活剂

Q4：酶加进培养基中容易失活，那我们加酶有什么效果？

A4：我们采用技术手段降低酶在培养基中的失活率，保证加酶平皿有效。

Q5：平皿加酶量如何测定？

A5：薄膜法：一般取样量为1g

        平皿法：一般取样量为0.1g

        回收率在50-200%为合格。

Q6：沉降量与哪些因素有关系？

A6：空气粉尘量；

        温度和湿度；

        原料；

        颗粒度；

        空气的饱和度。

Q7：沉降量测定有哪些方法？

A7：沉降量一般按以下过程测定：

      1.  正常生产时，在正常布碟点旁放置两到三个灭菌干燥的空皿

      2.  暴露与监控用沉降皿相同的时间（0.5-4小时）后取出

      3.  取一定体积V的去离子水冲洗空皿

      4.  取V1的冲洗液过液相，得到浓度C，每个布碟点取平均浓度

           5.  得到每个皿中的粉尘沉降量M＝CV，单位mg／皿

      6.  根据不同布碟点粉尘沉降量和不同品种抗生素，通过梯度实验确定培养基中的加酶量。

一般采用高效液相色谱法，或利用分析天平称重法进行测定。

杭州北望生物技术有限公司成立于2007年12月，是一家集新药研究技术服务、药品相关试剂销售为一体的高科技公司。公司致力于生物试剂、医药中间体和药用辅料的研究开发、制造与贸易，同时提供与药品开发相关的技术服务，如青霉素酶,头孢菌素酶,金属酶,β-内酰胺酶,加酶平皿等，皆是我公司研究成果